N-STORM

Технология локализационной микроскопии, одной из разновидностей которых является N-STORM, основана на последовательном возбуждении и гашении индивидуальных флуорохромов и их высокоточной локализации. Одновременное свечение небольшого количества флуорохромов позволяет с высокой точностью картировать положение каждого из них и за счет этого добиться разрешения вплоть до 20 нм в латеральной и до 50 нм в аксиальной плоскостях.

Требования к препаратам:

• Буфер. Для эффективного сбора данных необходимо обеспечить множество циклов возбуждения/гашения флуорохромов препарата. Для этого необходимо поместить препарат в среду в специфический буфер для локализационной микроскопии, включающий агенты, препятствующие окислению флуорохромов и поддерживающие их в темновом состоянии (рецепты буферов). Буфер обладает ограниченным временем жизни и приготавливается непосредственно перед съемкой.
• Флуорохромы. Локализационная микроскопия требует флуорохромы с высокой устойчивостью к выгоранию и со способностью долгое время существовать в в темновом состоянии. Оптимальным является использование Alexa 647. Помимо этого также возможно использовать фотопереключаемые флуорохромы, а для многоцветного STORM — конъюгированные пары флуорохромов (подробнее).
• Неподвижность препарата. Для точной локализации положения флуорохромов требуются абсолютная неподвижность препарата на протяжении множества циклов возбуждения и гашения.
• Покровное стекло. Наши объективы настроены на толщину покровного стекла 0.17 мм. STORM-микроскопия подразумевает высокие требования к чистоте покровного стекла.

Характеристики микроскопа с системой суперразрешения N-STORM

Станина:

• Инвертированный моторизованный микроскоп Eclipse Ti-E (Nikon)
• Моторизованный предметный столик с движениями по X/Y осям и Пьезо-вставкой для перемещения по Z-оси
• Моторизованная револьверная головка
• Функция автоматической фокусировки Perfect Focus
• Моторизованная турель для смены кубов с фильтрами
• Вставки-держатели с возможностью размещения объекта наблюдения в чашке Петри 35 мм, на предметном стекле 25х76 мм или в многолуночном планшете

Лазеры:

• Лазер 647 нм — основной, для гашения
• Лазер 405 нм — дополнительный
• Лазер 457 и 561 нм — для многоцветного STORM

Объективы:

• Объектив апохромат, увеличение 100X с числовой апертурой 1.49, рабочий отрезок 0.12мм с коррекцией толщины покровного стекла в диапазоне 0.13 – 0,20 мм, с компенсацией температурных аббераций в диапазоне +23°С-+37°С. Настроен на покровное стекло 0.17 мм и комнатную температуру. Масляная иммерсия

Камера:

• EM-CCD iXon DU-897E (Andor) камера высокого разрешения с охлаждением матрицы до -100°С, 512Х512 пикселей, размер пикселя 16Х16 мкм