N-SIM

Микроскопия с использованием структурированного освещения N-SIM позволяет улучшать разрешение приблизительно в два раза по сравнению с классической микроскопией, сохраняя при этом возможность работы с живыми объектами, приемлемую скорость съемки и позволяя работать со стандартными красителями.

Ограничения SIM-микроскопии:

• SIM позволяет изучать субструктуры размером 100-200 нм. Если объект интереса больше 200 нм – SIM не дает преимуществ по сравнению с классической флуоресцентной микроскопией, если меньше 100 нм – SIM не позволит получить дополнительную информацию.
• 3D-SIM позволяет улучшить разрешение по xyz в 1.8 раз, не более. Максимально доступное в нашей системе: 120 нм в зеленом канале и 145 нм в красном канале. 2D-SIM-TIRF теоретически позволяет получить разрешение до 80 нм в зеленом канале.
• SIM не возможна для объектов с низким контрастом. Низкий контраст характерен для толстых и/или равномерно окрашенных объектов.
• SIM — медленная процедура. Минимальное время съемки 1 кадра при очень высоком уровне сигнала— 30 миллисекунд. 1 оптический срез в режиме 3D-SIM — 15 кадров на 1 канал, т. е. 450 миллисекунд. На протяжении этого времени объект должен быть абсолютно неподвижен.
• SIM не делает чудес! Плохой препарат SIM лучше не сделает. Рекомендуется проверять свои препараты заранее в обычном широкопольном режиме.

Требования к препаратам:

• Флуорохромы, устойчивые к выгоранию (такие как Alexa). Проверить соответствие используемых флуорохромов нашим кубикам светофильтров, HYQ FITC и HYQ TRITC, можно на сайте MicroscopyU.com
• Толщина покровного стекла. Не верьте маркировке — измеряйте! Наши объективы откалиброваны для покровных стекол №1 (0,13 мм) и №1.5 (0,17 мм)
• Чистота покровного стекла. Покровное стекло должно быть ОЧЕНЬ чистым. Не следует прожигать стекла в спирте для их стерилизации: остается копоть. 
• Покровное стекло должно очень ровно лежать на предметном. 
• Среда для заключения образца. Для объектива 100х oil показатель преломления среды должен быть равен 1.515 (мовиол), для водного объектива 60х — 1,3 (вода). Рекомендуется добавлять в среду для заключения реагенты, предотвращающие выгорание (anti-fade) (например, DABCO, NPG) 

Характеристики оптического микроскопа с суперразрешением Nikon N-SIM

Станина:

• Инвертированный моторизованный микроскоп Eclipse Ti-E (Nikon)
• Моторизованный предметный столик с движениями по X/Y осям и Пьезо-вставкой для перемещения по Z-оси
• Моторизованная револьверная головка
• Функция автоматической фокусировки Perfect Focus
• Моторизованная турель для смены кубов с фильтрами
• Вставки-держатели с возможностью размещения объекта наблюдения в чашке Петри 35 мм, на предметном стекле 25х76 мм или в многолуночном планшете
• Камера для прижизненных наблюдений Tokai Hit с возможностью длительно поддерживать влажность, температуру и уровень CO2. Подогрев объектива.

Лазеры:

• Лазер 488 нм мощностью 200 мВт с системой охлаждения
• Лазер 561 нм мощностью 100 мВт с системой охлаждения

Светофильтры:

• Набор фильтров для FITC 450-490/505/520 нм
• Набор фильтров для TRITC 510-560/575/590 нм

Объективы:

• Объектив апохромат, увеличение 100X с числовой апертурой 1.49, рабочий отрезок 0.12 мм с коррекцией толщины покровного стекла в диапазоне 0.13 – 0.20 мм, с компенсацией температурных аббераций в диапазоне +23°С-+37°С. Масляная иммерсия

Камера:

• EM-CCD iXon DU-897E (Andor) камера высокого разрешения с охлаждением матрицы до -100°С, 512Х512 пикселей, размер пикселя 16Х16 мкм